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| 概要 |
表面プラズモン共鳴現象（SPR）を利用したオンサイトで簡便に残留農薬を計測できるフロー型イムノセンサーの開発を目的とし，メチルパラチオン（MP）の間接競合イムノアッセイ法を確立した．牛血清アルブミン（BSA）にMPを化学結合したMP-BSAコンジュゲートをSPRセンサーチップ上に物理吸着によって固定化し，これをフローシステムに組み込み，MPに対する応答性を検討した．SPRセンサーチップは，50 p...pm MP-BSAコンジュゲート溶液をセンサーチップへ導入し，続いて10 mg/mL BSA溶液を導入し，非特異吸着を防ぐために未修飾のチップ表面をブロッキングして作製した．MP-BSAコンジュゲートのセンサーチップへの固定化密度を，飽和吸着量の約20% として作製したセンサーチップを用いて，間接競合法により60 ppm抗MP抗体を含むMP溶液（1～5000 ppb）をSPRセンサーに導入し，SPRセンサーの共鳴角度変化を測定した．本法によるMPの検出限界は，MP濃度ゼロにおける角度変化の85% におけるMP濃度とすると，10 ppbであった．また，ペプシンを含むpH 2 HCl-glycine溶液をセンサーチップに導入することによって，センサーチップ上のMP-BSAコンジュゲートと結合した抗MP抗体を解離させることができ，1枚のセンサーチップを用いて少なくとも20回繰り返し測定が可能であることが分かった．
A surface plasmon resonance (SPR) sensor for the determination of methyl parathion (MP) was developed using an indirect competitive immunoassay. A sensor chip was prepared by immobilizing a MP-BSA conjugate on a gold film on the sensor chip, followed by blocking with BSA to prevent the non-specific adsorption of MP and an anti-MP antibody onto the unmodified surface of the sensor chip. An evaluation of the adsorption equilibrium of MP-BSA onto the sensor chip by measuring the SPR angle shift revealed that the adsorption equilibrium was expressed by a Langmuir-type adsorption isotherm equation. The adsorption constant and the adsorbed amount of MP-BSA onto the sensor chip were found to be 5.0 × 10^5 M^<−1> and 0.95 ng/mm^2, respectively. An MP solution (1∼5000 ppb) containing 60 ppm anti-MP antibody was introduced into the SPR sensor chip, and then the SPR angle shift was measured. The detection limit, defined as the angle shift of 85% for the blank, was found to be 10 ppb. The anti-MP antibody bound to the MP-BSA conjugate on the sensor chip was able to be dissociated by introducing an HCl-glycine solution (pH 2) into the sensor chip. Duplicate measurements with a single sensor chip were possible for at least 20 times.続きを見る
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