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＜Doctoral Thesis＞
DIF-1 inhibits the Wnt/β-catenin signaling pathway by inhibiting TCF7L2 expression in colon cancer cell lines
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| Abstract | 我々はこれまでに細胞性粘菌Dictyostelium discoideumが分泌する分化誘導因子Differentiation-inducing factor-1（DIF-1）がβ-cateninタンパク質の分解を誘導することでWnt/β-cateninシグナル伝達経路を阻害し、ヒトがん細胞株の増殖を抑制することを報告してきた。β-cateninタンパク質の分解がDIF-1の効果に不可欠であるか否...かを明らかにするために、我々はWnt/β-cateninシグナル伝達経路が恒常的に活性化されているヒト由来大腸がん細胞株（HCT-116、SW-620、DLD-1）に対するDIF-1の効果を検討した。DIF-1はβ-cateninタンパク質の分解非依存性にcyclin D1の発現をmRNA、タンパク質レベル共に減少させ、G_0/G_1期における細胞周期拘束を起こすことにより、強力に細胞増殖を抑制した。DIF-1によるtranscription factor 7-like 2（TCF7L2）発現量の抑制によって、TCF依存性転写活性及びcyclin D1プロモーター活性が抑制されることが明らかとなった。ルシフェラーゼレポーター活性測定及びTCF7L2プロモーター断片を用いたEMSAにより、翻訳開始点を起点として-609から-601塩基上流に位置する転写因子early growth response-1（Egr-1）結合部位が、DIF-1の効果に関与していることが示された。さらに、RNAi法による内在性TCF7L2の欠失はcyclin D1プロモーター活性及びタンパク質量の減少につながり、そして、TCF7L2の強制発現はDIF-1によるTCF依存性転写活性及びcyclin D1プロモーター活性の低下効果を減弱させた。したがって、DIF-1は大腸がん細胞株において、Egr-1依存性のTCF7L2転写活性を減少させることによりTCF7L2発現を抑制し、Wnt/β-cateninシグナル伝達経路を阻害していることが示唆された。我々の結果は、DIF-1によるWnt/β-cateninシグナル伝達経路の阻害機構に新たな知見をもたらすものである。 We previously reported that differentiation-inducing factor-1 (DIF-1), a morphogen in Dictyostelium discoideum, inhibits the proliferation of human cancer cell lines by inducing β-catenin degradation and suppressing the Wnt/β-catenin signaling pathway. To determine whether β-catenin degradation is essential for the effect of DIF-1, we examined the effect of DIF-1 on human colon cancer cell lines (HCT-116, SW-620 and DLD-1), in which the Wnt/β-catenin signaling pathway is constitutively active. DIF-1 strongly inhibited cell proliferation and arrested the cell cycle in the G0/G1 phase via the suppression of cyclin D1 expression at mRNA and protein levels without reducing β-catenin protein. TCF-dependent transcriptional activity and cyclin D1 promoter activity were revealed to be inhibited via suppression of transcription factor 7-like 2 (TCF7L2) expression. Luciferase reporter assays and EMSAs using the TCF7L2 promoter fragments indicated that the binding site for the transcription factor early growth response-1 (Egr-1), which is located in the –609 to –601 bp region relative to the start codon in the TCF7L2 promoter, was involved in DIF-1 activity. Moreover, RNAi-mediated depletion of endogenous TCF7L2 resulted in reduced cyclin D1 promoter activity and protein expression, and the overexpression of TCF7L2 overrode the inhibition of the TCF-dependent transcriptional activity and cyclin D1 promoter activity induced by DIF-1. Therefore, DIF-1 seemed to inhibit the Wnt/β-catenin signaling pathway by suppressing TCF7L2 expression via reduced Egr-1-dependent transcriptional activity in these colon cancer cell lines. Our results provide a novel insight into the mechanisms by which DIF-1 inhibits the Wnt/β-catenin signaling pathway.show more |
| Table of Contents | 要約 序論 材料と方法 結果 考察 引用文献 |
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| File | FileType | Size | Views | Description |
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med2473
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665 KB | 1,734 | 本文 | |
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med2473_abstract
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118 KB | 393 | 要旨 |
Details
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| Created Date | 2013.07.12 |
| Modified Date | 2023.12.08 |